Plasmid midiprep Protocols

1.菌体を集める為に菌液の入った50mlチューブを10分間遠心（3,500rpm,4℃）し、上清を捨てる。

2.900μℓのS1を加え、ペレットを溶解し、溶液を均等になるように1.5mlチューブ×4本に250μlずつ移す。

3.それぞれのチューブに250μℓのS2を加え、しっかり混和する（ボルテックス○）。20〜30分間待つ。（ここで完全に変性させる）

4.それぞれのチューブに350μℓのS3を加え、しっかり（4〜6回）混和する。

（ボルテックス○）

5.5分間遠心する。（15,000rpm、4℃）

6.注意深く上清をとり（750μl程度）、その上清をそれぞれ別々のカラムに移し、さらに1分遠心。廃液は捨てる。

7.PW Bufferをそれぞれ750μℓ加え、1分間遠心し、廃液を捨てる。

8.廃液を捨てたら、さらに1分間遠心し（ここでしっかりカラムから水分を飛ばす）、それぞれのカラムを新しい1.5mlチューブに移す。

9.それぞれのカラムにEB Bufferを55μℓ加え、1分間静置の後、1分間遠心する。Bufferを加える際、カラム膜の中心に加えることに注意する。